آگار MSA به عنوان یک محیط انتخابی و افتراقی برای جداسازی و شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه‌های بالینی و غیر بالینی استفاده می‌شود. این محیط کشت، رشد گروه خاصی از باکتری‌ها را تقویت و در عین حال از رشد باکتری‌های دیگر جلوگیری می‌کند.
مقدمه‌ای بر محیط کشت مانیتول سالت آگار
آگار MSA به عنوان یک محیط انتخابی و افتراقی برای جداسازی و شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه‌های بالینی و غیر بالینی استفاده می‌شود. این محیط کشت، رشد گروه خاصی از باکتری‌ها را تقویت و در عین حال از رشد باکتری‌های دیگر جلوگیری می‌کند. مانیتول سالت آگار، یک محیط کشت انتخابی است که طبق توصیه‌های چاپمن برای جداسازی استافیلوکوک‌های بیماری‌زای احتمالی تهیه شده است.
ترکیبات مانیتول سالت آگار
گرم/ لیتر |
مواد تشکیل دهنده |
5.0 |
پانکراس دایجست کازئین |
5.0 |
پپتیک دایجست بافت حیوانی |
1.0 |
عصاره گوشت گاو |
75.0 |
سدیم کلرید |
10.0 |
D-mannitol |
0.025 |
فنول رد |
15.0 |
آگار |
111.025 |
جمع کل |
آب مقطر = ۱۰۰۰ میلی‌لیتر
pH نهایی ۷٫۴ ± ۰٫۲ در ۲۵ درجه سانتیگراد.
اساس محیط کشت MSA
مانیتول سالت آگار حاوی پپتون‌ها و عصاره گوشت گاو است که نیتروژن، ویتامین‌ها، مواد معدنی و اسیدهای آمینه ضروری برای رشد را تأمین می‌کند. غلظت 7.5% کلرید سدیم باعث مهار جزئی یا کامل ارگانیسم‌های باکتریایی غیر از استافیلوکوک می‌شود. کلرید سدیم همچنین الکترولیت‌های ضروری برای حمل‌ونقل و تعادل اسمزی را تأمین می‌کند.
مانیتول، کربوهیدرات قابل تخمیر است که تخمیر آن منجر به تولید اسید می‌شود که توسط شناساگر فنول رد شناسایی می‌شود و به تمایز گونه‌های استافیلوکوک کمک می‌کند. استافیلوکوک‌های کواگولاز مثبت (به‌عنوان‌مثال استافیلوکوکوس اورئوس) کلنی‌های زرد و محیط زرد رنگ اطراف را تولید می‌کنند در حالی که استافیلوکوک‌های کواگولاز منفی، کلنی‌های قرمزرنگ تولید می‌کنند و هیچ تغییر رنگی در شناساگر فنول رد ایجاد نمی‌کنند. آگار عامل انسجام است.
افزودن امولسیون 5% v/v زرده تخم مرغ ، امکان تشخیص فعالیت لیپاز استافیلوکوک‌ها همراه با تخمیر مانیتول را فراهم می‌کند. نمک، امولسیون زرده تخم مرغ را پاک می‌کند و تولید لیپاز به صورت ناحیه مات زردرنگ در اطراف کلنی‌ها تشخیص داده می‌شود.
موارد استفاده از مانیتول سالت آگار
-
برای جداسازی انتخابی و تمایز استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه‌های بالینی استفاده می‌شود.
-
همچنین برای شمارش استافیلوکوک‌ها در مواد غذایی و لبنیات استفاده می‌شود.
-
این محیط همچنین در راهنمای تجزیه و تحلیل باکتریولوژیک برای آزمایش لوازم آرایشی گنجانده شده است.
-
همچنین در بررسی باکتریولوژیکی آب استخر، آبگرم و آب آشامیدنی با استفاده از فیلتراسیون غشایی استفاده می‌شود.
تهیه محیط کشت MSA
-
۱۱۱.۰۲۵ گرم از محیط کشت MRS را در 1000 میلی‌لیتر آب مقطر اضافه کنید.
-
ترکیب حاصل را به خوبی بجوشانید تا کاملاً حل شوند.
-
در دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ تا ۲۰ دقیقه انکوبه کنید.
(اختیاری: اضافه کردن امولسیون زرده تخم مرغ 5% v/v)
-
تا دمای ۵۰-۴۵ درجه سانتیگراد خنک کنید و در پتری دیش‌ها بریزید.
تفسیر نتایج بر روی مانیتول سالت آگار
نتایج |
ارگانیسم |
کلنی‌های زرد رنگ: مناطق زرد رنگ |
استافیلوکوکوس اورئوس |
کلنی‌های بی‌رنگ یا قرمز: مناطق قرمز رنگ |
استافیلوکوک ها به غیر از S.aureus |
بدون رشد تا رشد بسیار کم |
استرپتوکوک ها |
رشد زیاد، سفید تا نارنجی |
میکروکوکس |
بدون رشد تا رشد بسیار کم |
باکتری‌های گرم منفی |
کنترل کیفیت در مانیتول سالت آگار
کنترل مثبت: استافیلوکوکوس اورئوس ATCC 6538، کلنی‌های زرد با اندازه متوسط
کنترل منفی: اشریشیا کلی ATCC 25922، مهار جزئی تا کامل.
محدودیت‌های محیط کشت MSA
-
چندین گونه استافیلوکوک به غیر از اورئوس، مانیتول مثبت هستند و کلنی‌های زرد رنگی را ایجاد می‌کنند که توسط مناطق زرد رنگ احاطه می‌شوند (مانند capitis، S. xylosus، S. cohnii، S. sciuri، S. simulans و گونه‌های دیگر). بنابراین، آزمایشات بیوشیمیایی بیشتری برای شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس یا گونه‌های دیگر ضروری است.
-
بیشتر ارگانیسم‌ها (غیر از استافیلوکوک‌ها) در مواجهه با غلظت بالای نمک موجود در مانیتول سالت آگار مهار می‌شوند؛ البته به جز برخی از موجودات دریایی هالوفیل.
-
برخی از سویه‌های استافیلوکوکوس اورئوس ممکن است تخمیر تأخیری مانیتول را نشان دهند. پلیت‌های منفی قبل از دور ریختن باید مجدداً به مدت یک شب انکوبه شوند.
-
استافیلوکوکوس اورئوس احتمالی باید با آزمایش کواگولاز تأیید شود.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.